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急性心肌梗死患者IL-22动态变化及意义
石磊，刘世欢，刘伶，施莹，吉庆伟，陆政德，
赵宣亮，曾涛，薛焱，邓学兴，林英忠
国家自然科学基金资助项目（编号：）；广西自然科学基金资助项目（编号：CXNSFAA）；广西医疗卫生重点科研课题(编号：重)
南宁，广医院心内科
石磊（-），女，在读研究生，研究方向：冠心病的诊治。E-mail:53
. 急性心肌梗死（acutemyocardialinfarction，AMI）后的心室重塑是指临床上常见的进行性发展的病理生理过程，即心肌梗死后心室大小、形态、结构和功能的变化过程，包括梗死区心肌坏死、非梗死区心肌肥大、间质纤维化、心室壁增厚扩张并导致整个心室的进行性扩张、变形和收缩功能降低等。随着冠脉介入治疗的发展及普及，AMI的短期病死率有所下降，但梗死后心室重塑所致的心衰及长期病死率依然居高不下[1，2]。白细胞介素-22(IL-22)是在年发现的一种新型细胞因子[3，4]。IL-22可由Th1、Th17、Th22、Tc22、γδT、NK细胞、NK-T淋巴细胞及淋巴结组织诱导细胞(lymphoidtissueinducer，LTi)、LTi样细胞产生[5-7]。近年来，IL-22在心血管疾病中的研究不断有新的进展，冠心病[8]、病毒性心肌炎[9]、心衰[10]等疾病的发生发展均与IL-22相关。本研究通过心脏彩色多普勒超声检查评估研究对象心功能及左心室重塑情况，采用酶联免疫吸附法(ELISA)及实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定AMI患者和对照组患者的血清IL-22及IL-22mRNA水平，比较其动态变化，初步探讨IL-22与AMI后左心室重塑的关系。1对象与方法1.1研究对象选取-01—-12在我院住院诊断为急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)并经冠状动脉造影证实的患者60例为研究组，其中男33例，女27例，年龄(61.9±11.89)岁。另选取同期同院经冠状动脉造影排除冠心病者30例为对照组，其中男15例，女15例，年龄(59.4+11.8)岁。
1.2入选与排除标准研究组入选标准为符合国内、国际STEMI诊断标准：胸痛症状30min；心电图同时存在至少2个肢体导联或相邻胸导联ST段抬高2mm或新出现完全性左束支传导阻滞，或心肌酶谱（最好是肌钙蛋白）升高正常上限3斜；冠状动脉造影证实前降支、左回旋支、右冠脉1支以上血管狭窄程度50%，并由2位具有冠脉介入资质、经验丰富的医师独立判定为AMI罪犯血管，且梗死面积相当。对照组入选标准为冠状动脉造影证实前降支、左回旋支、右冠脉狭窄均50%的住院患者。两组研究对象均排除：(1)入院时及住院期间出现心源性休克；(2)未获得院内或2周/4周随访心脏彩超资料（包括4周内死亡患者）；(3)有陈旧性心肌梗死、慢性心功能不全、冠脉血运重建史；(4)严重肝、肾功能不全；(5)周围血管栓塞性疾病；(6)感染性疾病、甲亢、糖尿病、恶性肿瘤、全身免疫性疾病、妊娠等。
1.3标本采集90例患者均于冠状动脉造影术后2h、2周、4周空腹时抽取10ml肱静脉血置于一次性使用真空采血管普通管（无添加剂，江苏精致科技有限公司，赣食药监械[准]字第号），取血清置于-80℃冻存待测；抽取10ml肱静脉血置于一次性使用真空采血管肝素管（肝素钠，湖南平安医械科技有限公司，批导），分离外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcell．PB-MC)，采用Trizol(总RNA提取试剂，碧云天产品编号R）提取总RNA，置-80℃冻存备检。
1.4IL-22浓度及表达量检测
1.4.1ELISA法检测血清中IL-22含量取已制备好的血清，按ELISA试剂盒（Ebioscience美国）说明书操作，即刻测量标本A值，根据说明书绘制标准曲线，并根据标准曲线查找其对应的浓度范围。每组样品点3孔。所用仪器为酶标仪（GF-M，高密彩虹分析仪器有限公司）。
1.4.2RT-PCR检测不同时点PBMC中IL-22mRNA表达水平取已制备好的PBMC总RNA为模板，按照逆转录试剂盒(TakaraBiotechnology)说明书进行逆转录反应，合成cDNA第一链，-20℃保存。在NCBI数据库中查询p一肌动蛋白(3-actin)、IL-22基因序列，应用primer5.0设计引物与探针(IL-22F5-CAACTTCCAGCAGCCATACA-3R5-GTTGAGC-ACCTGCTTCATCA-3β-actinF5-ACCCACACTGT-GCCCATCTAC-3R5-AGCCAAGTCCAGACGCAGG-3)交由上海英骏生物技术有限公司合成。以制备的cDNA为模板，根据SYBRGreenRT-PCR一步法试剂盒说明书分别扩增IL-22基因序列，并得出荧光曲线和相应的△Ct值。以正常对照组各值为参照，采用2△△Ct法分析目标基因的相对表达量（倍）。反应条件：95℃预变性10s，95℃变性Ss，60℃退火及延伸30s，进行40个循环。配好反应体系后，将各个样品逐一加入96孔板中，每个样品设置3个复孔，RT-PCR反应在Bio-RadCFXManag-er2.1系统上进行，重复3次。
1.5心脏结构与功能超声心动图检测所有患者均于冠状动脉造影术后2h、2周、4周行经胸超声心动图检查（取卧位，静息状态，同一专业人员检测）。心脏超声检查应用美国GeVingmedUltrasoundAs公司VividE9彩色多普勒超声仪，并采用改良Simp-son法测量左室舒张末期内径(leftventricularenddia-stolicdimension．LVEDD)、左室短轴缩短率(leftven-tricularfractionalshorting．LVFS)、左室射血分数(leftventriculareectionfraction．LVEF)。定义我院正常参考值范围：LVEDD35～55mm;LVFS-/o;LVEF-/0.
1.6其他临床生化指标及资料采集生化指标均为空腹抽取肱静脉血并由我院检验科同一专业人员采用OLYMPUSAU全自动生化分析仪进行检测。所有临床基线资料均在人院后采集病史，并作详细记录。
1.7统计学方法应用SPSS18.0统计学软件对数据进行处理，计量资料以均数±标准差（
χˉ+s）表示，两组间不同时点比较采用重复测量数据两因素多水平方差分析，组间两两比较采用Bonferroni检验，计数资料采用χ2检验，P0.05为差异有统计学意义。
2结果2.1两组临床资料和生化指标比较两组患者的性别、年龄、身高、体重、吸烟百分率、高血压患病率、甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、血糖等比较差异无统计学意义(P0.05)；超敏C反应蛋白(hs-CRP)组间比较差异有统计学意义(P0.01)。见表1。
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2.2两组研究对象不同时点IL-22、IL-22mRNA水平及左心室功能比较
2.2.1研究组IL-22、IL-22mRNA水平在2h、2周、4周时均高于同时点对照组(P0.01)。研究组IL一22、IL-22mRNA水平在2周、4周时均高于2h时(P0.01)，但研究组IL-22、IL-22mRNA水平在2周时与4周时比较差异无统计学意义(P=0.)。见表2。
2.2.2研究组LVEDD在2周、4周时大于同时点对照组，2h时研究组与对照组LVEDD比较差异无统计学意义。研究组LVEDD在2周时和4周时均2h对，差异有统计学意义(P0.01)，且4周时LVEDD2周时(P0.01)。见表2。
2.2.3研究组LVFS、LVEF在2h、2周、4周时均较同时点对照组下降(P0.01)。研究组2周时和4周时LVFS、LVEF均2h时(P0.01)，且4周时LVFS、LVEF2周时(P0.01)。见表2。
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3讨论3.1IL-22受体(IL-22R)是由白介素-22受体1(IL-22R1)和白介素-10受体2（IL-10R2）组成的异源二聚体[13]。Guo等[14]证明IL-22R存在于心肌细胞上，且可随着IL-22含量的升高出现上调。一项关于IL-22在慢性心力衰竭(chronicheanfailure，CHF)中作用的临床研究表明，纽约心功能分级(NYHA)在Ⅱ级和Ⅲ级的患者，血清中IL-22的含量显著高于对照组，心功能Ⅳ级患者血清中IL-22的含量同对照组相比无统计学差异，考虑其中可能的原因为心衰末期过度耗所致[15]。多项研究表明IL-22在急性冠脉综合征患者中的含量明显高于正常对照组患者[8.16.17]。然而其具体机制均有待明确。Guo等[18]通过柯萨奇病毒B3(coxsackievirusB3，CVB3)诱导小鼠形成急性病毒性心肌炎(acutevirusmyocarditis．AVMC)、慢性心肌炎(chronicmyo-carditis．CMC)及扩张型心肌病(dilatedcardiomyopa-thy，DCM)模型，在第2、12、24周对小鼠进行研究中结果发现，与对照组相比，AVMC、CMC及DCM组小鼠中脾脏Th22细胞、血浆IL-22水平、心肌IL-22R、胶原蛋白1-A1（COLl-A1）、胶原蛋白3-A1(COL3-A1)、金属基质蛋白酶9(MMP-9)表达均明显增高，基质金属蛋白酶抑制剂一1（TIMP-1）表达水平降低，对这三组小鼠注射抗IL-22抗体后，其远期生存率明显降低，并且心肌纤维化程度增高，脾脏中Th22水平、血浆IL-22水平、心肌IL-22R表达均明显下降，COLl-A1、COL3-A1、MMP-9表达增高，这表明IL-22R存在于心肌细胞上，且IL-22具有抑制心肌纤维化的作用。
3.2成年人心肌细胞再生能力有限．梗死心肌愈合主要依赖炎症反应和瘢痕修复。在心肌梗死的修复期，坏死的心肌细胞逐渐被纤维组织替代，心肌修复的同时，心肌间质纤维化，使心室发生重塑。在此过程中，由于微环境中相关炎症因子，如肿瘤坏死因子一仪（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、转化生长因子β(TGF-β)等的刺激，主要来源于成纤维细胞的肌成纤维细胞(myofibroblasts．MyoFBs)被激活[19,20]。相关研究表明MyoFBs也可以促进非梗死区心肌细胞纤维化及胶原沉积，导致心肌形态及功能异常，最终导致心功能不全的发生[21,22]。因此，改善心肌梗死后心室重塑，抑制心肌细胞及间质纤维化起着决定性的作用。由此我们推测IL-22通过抑制心肌纤维化改善AMI后心室重塑。
3.3AMI后的短期和远期存活率最重要的决定因素之一是左心室功能状态，临床上评估左室功能最常用的诊断方法是超声心动图，而LVEF、LVEDD、LVFS是反映心功能及心室重塑的重要参数。本研究初步表明，AMI后患者LVEF及LVFS随着时间的推移呈下降趋势，LVEDD扩大，心室出现重塑。在此过程中，外周血中IL-22浓度及IL-22mRNA的表达量呈现上升趋势，这一动态变化表明IL-22很可能参与了AMI后心室重塑的过程，然而其具体机制有待进一步探讨和证实。
综上所述，随着AMI后心室发生重塑，IL-22在外周血中呈现出动态变化，且为持续上升趋势，这初步表明IL-22可能参与AMI后心室重塑过程，本研究为进一步探索其作用机制提供了临床理论依据，也为阐明AMI后心室重塑机制提供了新思路。
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本文刊载于《中国临床新医学杂志》年第2期，本平台首发。转载请标明出处。
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